Die Diagnostik akuter Leukämien steht heute auf vier Säulen: 1. die Beurteilung der Morphologie zusammen mit der Zytochemie. 2. die immunologische Untersuchung (Immunphänotypisierung), 3. die Zytogenetik und 4. die Molekularbiologie. Mit Hilfe der Morphologie gelingt in der Mehrzahl der Fälle eine Zuordnung zum lymphatischen oder myelo-monozytären Zellsystem. Die Immunphänotypisierung nutzt linien- und reifungsspezifische Proteinstrukturen (auf der Zelloberfläche oder intrazellulär) de r pathologischen Zellen aus, um diese näher zu charakterisieren. Für einige Leukämieformen sind gewisse zytogenetische u/o molekularbiologische Veränderungen spezifisch und lassen eine genaue Klassierung zu (z.B. AML M3 nach FAB mit t[15;17]). Die immunologische Diagnostik der akuten Leukämien beruht auf der Zuordnung zur Zell-Linie und auf dem Nachweis des Reifungsgrades der Blasten. Der Immunphänotyp der Blasten entspricht nicht immer dem physiologischen Antigenmuster, da z.t. auch linienfremd e aberrante Antigene exprimiert werden können. Das Grundprinzip der immunologischen
Diagnostik besteht im Nachweis der Antigene der
jeweiligen Blastenpopulation durch fluorochrommarkierte
Antikörper. |
Die Liniendeterminierung wird durch folgenden Marker bestimmt, wobei die einzelnen Marker unterschiedlich gewichtet werden: |
Score points |
B-lymphoid |
T-lymphoid |
Myeloid |
2 |
cCD79a |
cCD3 |
MPO |
1.5 |
CD19 |
CD2 |
CD13 |
1 |
TdT |
TdT
|
CD14
|
Es soll sowohl zwischen B- und T-Zell-Leukämien unterschieden werden als auch der immunologische Reifegrad definiert werden. |
Marker | pro-B ALL (B-I) | common ALL (B-II) | pre-B ALL (B-III) | mature-B ALL (B-ALL; B-IV) |
CD19 und/oder cCD79a und/oder cCD22 |
+ |
+ |
+ |
+ |
CD10 | - |
+ |
± |
± |
cIgµ | - |
- |
+ |
± |
sIg oder cKappa oder cLambda |
- |
- |
- |
+ |
TdT | + |
+ |
+ |
± |
HLA-DR | + |
+ |
+ |
+ |
CD34 | ± |
± |
± |
- |
Marker | pro-T ALL (T-I) |
pre-TALL (T-II) |
cortical-T ALL (T-III) |
mature-T ALL (T-IV) |
cCD3 | + | + | ± | - |
sCD3 | - | - | ± | + |
CD7 | + | + | + | + |
CD2 und/oder CD5 und/oder CD8 |
- | + | + | + |
CD1a | - | - | + | - |
TdT | + | + | + | ± |
HLA-DR | + | - | - | - |
CD34 | ± | ± | - | - |
CD10 | ± | ± | ± | - |
In der Diagnostik von Leukämien der myelo-monozytären Zellreihe steht die Morphologie zusammen mit der Zytochemie im Vordergrund und führt zur Einordnung in die FAB-Klassifizierung. Die Immunphänotypisierung hat hier eine bestätigende Funktion. Es besteht die Schwierigkeit, dass die Blasten mit Hilfe des Immunphänotyps nicht immer eindeutig der FAB-Klassifikation zugordnet werden können (z.B. kein eindeutiges Antigenmuster für die Monoblasten einer AML M5a). |
Marker | M0 | M1 | M2 | M3 | M4 | M5 | M6 | M7 |
MPO | + | + | + | + | + | + | + | - |
CD13 | + | + | + | + | + | + | + | ± |
CD33 | + | + | + | + | + | + | + | ± |
CD15 | - | + | + | ± | + | + | - | - |
CD14 | - | - | ± | - | + | + | - | - |
CD11b | - | - | ± | - | + | + | - | - |
CD71 | - | - | - | - | - | - | + | - |
Glyko | - | - | - | - | - | - | + | - |
CD42b | - | - | - | - | - | - | - | + |
CD61 | - | - | - | - | ± | ± | - | + |
CD34 | ± | ± | ± | ± | ± | ± | - | ± |
HLADR | ± | + | + | - | + | + | + | ± |
Ca. 5% der akuten Leukämien bleiben schwierig zu klassieren, weil sie sowohl lymphatische als auch myeloische Markers koexprimieren und sie werden deshalb biphänotypische Leukämien genannt. Diese Leukämien entstehen aus einer pluripotenten Progenitorzellen, welche die Fähigkeit hat, sich in beide Linien (lymphatisch und myeloisch) zu differenzieren.Die biphänotypische Leukämie muss von myeloischen Leukämien, welche lymphatische Marker aberrant exprimieren (Ly+AML) und von lymphatischen Leukämien, welche myeloische Markers aberrant zeigen (My+ALL) abgegrenzt werden. Die Diagnose einer biphänotypischen Leukämie basiert auf der Immunphänotypisierung. Ein Scoring System hilft die reinen biphänotypischen Leukämien zu definieren: |
Punkte | Lineage | |||
B-Lymphoid | T-Lymphoid | Myeloid | ||
2 | CD79a CD22 cIgM sIgM |
CD3 | MPO* | |
1 | CD19 CD10 |
CD2 CD5 CD3 CD8 |
CD13 CD33 |
|
0.5 | TdT | TdT CD7 CD1a |
CD11b CD11c CD14 CD15 |
Eine biphänotypische Leukämie liegt
bei einem Score > 2 in zwei separaten Linien vor. (Bei Score <2: entweder My+ALL oder Ly+AML) |
Die Definition einer akuten undifferenzierten Leukämie basiert auf immunphänotypischen Kriterien |
Höchstens einer
dieser "Undifferenzierungs" -Marker darf exprimiert werden: |
Zusätzlich
dürfen folgende Markers nicht exprimiert sein: |
HLA-DR TdT CD34 CD7 CD38 |
CD19c CD22 cCD3 CD13 CD33 CD61 Glykophorin |